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    一文與您分享通用PCR試劑盒的樣品制備方法
    點擊次數:62 發布時間:2022-06-17
      通用PCR試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產品,含有TaqDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR增強劑、上樣染料等所有PCR所需要的成分,用戶只需加入模板和引物即可進行PCR反應,具有廣泛的用途。
     
      今天小編要與大家分享的是通用PCR試劑盒的樣品制備方法:
     
      1.用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。。也可以選購本公司的一管式病毒DNAout或其升級版柱式病毒DNAout。本試劑盒免費贈送15次DNA病毒裂解液試用裝。稀釋陽性對照(以10E2-10E7這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的長為86bp的DNA的片段作為陽性對照。
     
      2.標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
     
      3.用帶芯槍頭分別加入45μL模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
     
      4.在7號管中加入5μL1×10E8拷貝/μL的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
     
      5.換槍頭,在6號管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
     
      6.換槍頭,在5號管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
     
      7.換槍頭,在4號管中加5μL1×10E5拷貝/μL的陽性對照到4號管中,得1×10E4拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
     
      8.重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設置qPCR反應(20μL體系,在樣品制備室進行)
     
      9.在PCR管中加入下列成分。(待測樣品需要做三次重復,下表只列出一次。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加。)
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