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    細胞遷移步驟實驗方法
    點擊次數:19 發布時間:2022-09-13

        細胞遷移即細胞劃痕法,是測定細胞遷移運動與修復能力的方法,類似體外傷口愈合模型。在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上,用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央區域劃線,去除中央部分的細胞,然后繼續培養細胞至實驗設定的時間,取出細胞培養板,觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區,以此判斷細胞的生長遷移能力,實驗通常需設定正常對照組和實驗組,實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等組別,通過不同分組之間的細胞對于劃痕區的修復能力,可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。

       當細胞長到融合成單層狀態時,在融合的單層細胞上人為制造一個空白區域,稱為“劃痕"。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區域使“劃痕"愈合。

     實驗方法:

    1、培養板接種細胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標記(方便拍照時定位同一個視野)。

    2、細胞消化后接入12孔板,數量以貼壁后鋪滿板底為宜(數量少時可培養一段時間至鋪滿板底)。

    3、細胞鋪滿板底后,用1ml槍頭垂直于孔板制造細胞劃痕,盡量保證各個劃痕寬度一致。(人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性,影響實驗結果,這也是該方法最大的缺陷)。

    4、吸去細胞培養液,用PBS沖洗孔板三次,洗去劃痕產生的細胞碎片。

    5、加入無血清培養基,拍照記錄。

    6、將培養板放入培養箱培養,每隔4-6小時取出拍照。

    7、根據收集圖片數據分析實驗結果。

     

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