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    PCR技術抽提步驟
    點擊次數:101 發布時間:2022-08-08

     PCR技術抽提步驟:
    1. 勻漿化作用
    取約100mg鼠腦組織放于玻璃研磨器內,先加0.2ml的Trizol溶液,研磨組織后,倒入1.5mlEP管中,再在研磨器內加入0.8ml的Trizol溶液洗,后全部再倒入EP管中。顛倒混勻10下,室溫靜置5分鐘。
    2. 分離階段
    每1mlTrizol中加0.2ml氯仿。蓋緊樣品管蓋,用手用力搖晃試管15秒,使其充分混勻,室溫靜置5分鐘。后12000rmp離心15分鐘。
    3. RNA的沉淀
    將上層水相轉入新的1.5mlEP管中(約400-500ul),加入0.5ml異丙醇,混勻后放于-20℃中1小時,后12000rmp離心10分鐘。
    3
    4. RNA的洗脫
    小心倒掉上清,留取沉淀。加1ml現配的75%的乙醇(預冷)振蕩洗滌RNA沉淀一次,后7500rmp離心5分鐘。
    5. RNA的再溶解
    小心倒掉上清,取沉淀置超凈工作臺開風機吹干(約30分鐘,此時RNA沉淀變透明)。注意不能讓RNA沉淀完全干燥(會極大地降低它地可溶性)。再在管中加20ul的DEPC水溶解,在55-60℃下孵育10分鐘助溶。
    6,RNA的保存
    提取的RNA保存于-70℃超低溫冰箱中,或立即用于逆轉錄。

    溫馨提示:全程佩戴一次性手套和口罩,手套要勤換,避免戴上的一次性的手套接觸可疑污染物。


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