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    IHC常用酶標二抗原理及特點
    點擊次數:191 發布時間:2022-07-25

    免疫組化(IHC)是利用抗原與抗體的特異性結合原理和特殊的標記技術,通過化學反應使標記抗體顯色,對組織細胞內的特異性抗原進行定位、定性、定量檢測的一門技術。本文主要總結二抗原理及其特點,以提供更好的選擇。

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                                                   IHC常用酶標二抗原理圖

    1. SABC法

    原理:SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)特有的高度親和力這一生物學性質,先將生物素與辣根過氧化物酶(HRP)結合,形成生物素化HRP,然后與鏈酶親和素按一定比例混合,形成SABC復合物。用生物素化二抗與第一抗體結合,再與SABC復合物聯結形成抗原~抗體~生物素化二抗~ SABC復合物。最后用底物顯色劑顯色。

    特點:該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點。

    2. SP法

    原理:根據生物素(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強結合力的原理設計。在一抗(兔源與鼠源)與相應的靶抗原結合后,生物素化標記的抗多價二抗與一抗特異結合;二抗上標記的生物素與標記了辣根過氧化物酶(HRP)的鏈霉親和素結合,形成抗原~特異性一抗~生物素化的二抗~HRP 標記的鏈霉親和素復合物。

    特點:該法孵育時間短(通常為10min),靈敏度高以及低背景染色等特點。

    3. Polymer酶標二抗法

    原理:該法采用一段多聚氨基酸聚合物做為載體鏈,將該多聚物與二抗結合,然后可再標記上多個HRP/AP酶分子,所以同樣具有很高的信號放大作用。

    特點:靈敏度高;操作步驟簡單;無需進行內源性的生物素封閉。

    4. 直接酶標二抗法

    該法是將HRP/AP酶分子直接標記于二抗上。因此需要普通的酶標二抗即可完成。實驗簡單,成本低,但是因為沒有信號放大作用,所以對很多表達豐度不是很高的抗原就可能檢測不到。


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