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    傳代培養實驗操作步驟
    點擊次數:203 發布時間:2022-06-14

    實驗原理:

    傳代培養是組織培養常規保種方法之一。也是幾乎所有細胞生物學實驗的基礎。當細胞在培養瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶,細胞才能繼續生長。這一過程就叫傳代。傳代培養可獲得大量細胞供實驗所需。傳代要在嚴格的無菌條件下進行,每一步都需要認真仔細的無菌操作。

    傳代培養實驗操作步驟:
    1.入無菌室之前用肥皂洗手,用75%酒精擦拭消毒雙手。
    2.倒置顯微鏡下觀察細胞形態,確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數。將培養用液置37℃下預熱。
    3.超凈臺臺面應整潔,用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。
    4.打開超凈臺的紫外燈照射臺面20min左右,關閉超凈臺的紫外燈,打開抽風機清潔空氣,除去臭氧。
    5.點燃酒精燈;取出無菌試管,巴斯德吸管和刻度吸管;安上橡皮頭;過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內。
    6.將培養用液瓶口用75%酒精消毒,過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。
    7.倒掉培養細胞的舊培養基。酌情可用2-3mLHanks液洗去殘留的舊培養基,或用少量胰酶涮洗一下。
    8.每個大培養瓶加入1mL胰酶,小瓶用量酌減,蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察,當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養瓶,使細胞脫離胰酶,然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。
    9.加入少量的含血清的新鮮培養基,反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散,再根據分傳瓶數補加一定量的含血清的新鮮培養基(7~10mL/大瓶,3~5mL/小瓶)制成細胞懸液,然后分裝到新培養瓶中。蓋上瓶蓋,適度擰緊后再稍回轉,以利于CO?氣體的進入,將培養瓶放回CO?培養箱。
    10.對懸浮培養細胞,步驟7-9不做??蓪⒓毎麘乙哼M行離心去除舊培養基上清,加入新鮮培養基,然后分裝到各瓶中。


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