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    細胞進行爬片流程及注意事項
    點擊次數:628 發布時間:2022-03-01

    在做免疫熒光(IF),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(TUNEL)時,免不了要制備細胞爬片,爬片質量完全決定了最后拍照的質量以及實驗數據的精準性?,F就如何制備好的細胞爬片介紹。

    細胞進行爬片操作流程:

    1. 胰酶消化細胞后計數重懸細胞于完全培養基中(懸浮細胞直接離心)。

    2. 加細胞時,根據玻片的大小,先在每個孔里準備放爬片的位置滴少量培養基,目的是使玻片與培養皿靠培養基的張力粘合到一起,然后放玻片,防止加細胞懸液時玻片漂起,造成雙層細胞貼片。整個過程注意無菌操作。

    3. 根據自己的需要選擇合適的細胞密度種入培養板內即可

    保存細胞爬片時,一般用培養皿或避光濕盒,先在皿底放一層面巾紙,然后再放爬片,這樣方便做實驗時取片。然后蓋上蓋子,并在蓋子上做標記,為避免混淆。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照沒有問題的。


    細胞進行爬片注意事項:

    1. 使用細胞爬片時(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面積往往會比爬片面積多出一部分,加細胞懸液時常常就是細胞鋪滿整個孔底,有時細胞生長邊集現象,就是靠近壁邊緣密度要高些,這樣處于中央玻片上爬的細胞數量就可能相對較少)。比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內后,加細胞懸液時只滴到玻片上,一直滴到液體布滿整個玻片又不會溢出玻片邊緣。

    2. 按照實驗設計,作用一定時間后取玻片。注意細胞不能太密,否則容易掉片。




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