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基本原理:
通過大量對比某一種細菌或病毒的基因,得到該細菌或病毒共同保守序列,根據該序列設計特異性引物,通過PCR擴增,即可獲得相應大小的片段,以此來檢測該細菌或者病毒的感染/污染狀態。
預期用途:
本品為常規PCR檢測試劑盒,供體外檢測使用。通過檢測可以確認各種待檢標本(如血液、糞便、食物、生物材料等) 否感染或污染特定細菌或者病毒。
操作步驟
(1)標本的收集和預處理:加100-1000μl樣本(血液或食物提取物等)于1.5ml EP管中,臺式高速離心機速離心5分鐘,棄上清,沉淀用殘液混勻作為檢測摸板。DNA樣本的進一步純化,采用等量酚抽提,商業DNA純化柱純化(詳細步驟按Qiagen說明書進行)
①:加100-200μl樣本于1.5ml EP管中加等量的酚/異戊醇(25:24:1)抽提,漩渦振蕩,臺式離心機離速5分鐘。
②:上清100-200μl轉移至新EP管中,加等量,振蕩,離心。
③:上清加4倍的Qiagen結合緩沖液移至純化柱,洗滌緩沖液洗柱兩次,加50μl dH2O洗脫收集純化的樣本。