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    首頁 > 技術與支持 > 曲霉屬通用PCR試劑盒反應的五點要素
    曲霉屬通用PCR試劑盒反應的五點要素
    點擊次數:616 發布時間:2020-09-29

    曲霉屬通用PCR試劑盒注意事項:

    1.基礎程序;

    2.擴增溫度和延伸溫度;

    3.反應時間;

    4.循環次數;

    5.PCR 反應液的配制;

    6.PCR技術的基本原理;

    7.PCR的反應動力學;

    8.PCR擴增產物;

    9.PCR反應體系與反應條件。


    曲霉屬通用PCR試劑盒反應五要素:
     
    參加曲霉屬通用PCR試劑盒反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

    引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論

    上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模

    板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

    ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

    ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

    ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。

    ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

    ④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,

    產生非特異的擴增條帶。

    ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導

    致PCR失敗。

    ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克

    隆很有好處。

    ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。引物量:每條引物的濃度0.1~

    1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度

    偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

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